RESUMO
Abstract Microsporidia are obligate intracellular fungi with a remarkable ability to infect a wide range of invertebrate and vertebrate hosts. Namely, Enterocytozoon bieneusi is the most frequently microsporidia reported worldwide, and mainly associated with chronic diarrea and wasting syndrome in AIDS patients. Microscopy and PCR-based detection techniques are effective for diagnosis and identification of species and genotypes; however, these methods should be standardized in each laboratory. In this study, we performed microscopy and nested PCR techniques with PCR product sequencing to detect E. bieneusi in human stool samples. These techniques, if applied together, might prove useful for diagnosis and future epidemiological studies of intestinal microsporidiosis in Argentina.
Resumen Los microsporidios son hongos intracelulares obligados con una notable capacidad para infectar una amplia gama de hospedadores invertebrados y vertebrados. Enterocytozoon bieneusi es el microsporidio más frecuentemente reportado en todo el mundo, principalmente tricrómicaasociado con diarrea crónica y síndrome debilitante en pacientes con sida. Las técnicas dedetección basadas en microscopía y PCR son útiles para el diagnóstico y la identificación deespecies y genotipos, pero estos métodos deben estar estandarizados en cada laboratorio.En este estudio evaluamos técnicas de microscopía y PCR anidada, con secuenciación de losproductos, para detectar E. bieneusi en muestras de heces humanas. Estas técnicas, usadas con-juntamente, podrían ser útiles para su aplicación en el diagnóstico de microsporidiosis intestinaly para realizar estudios epidemiológicos de esta afección en Argentina.
Assuntos
Humanos , Microsporídios , Enterocytozoon , Esporos Fúngicos , Reação em Cadeia da Polimerase , Microsporídios/genética , Enterocytozoon/genética , FezesRESUMO
The identification and characterisation of Cryptosporidiumgenotypes and subtypes are fundamental to the study of cryptosporidiosis epidemiology, aiding in prevention and control strategies. The objective was to determine the genetic diversity ofCryptosporidium in samples obtained from hospitals of Rio de Janeiro, Brazil, and Buenos Aires, Argentina. Samples were analysed by microscopy and TaqMan polymerase chain reaction (PCR) assays forCryptosporidium detection, genotyped by nested-PCR-restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis of the 18S rRNA gene and subtyped by DNA sequencing of the gp60 gene. Among the 89 samples from Rio de Janeiro, Cryptosporidium spp were detected in 26 by microscopy/TaqMan PCR. In samples from Buenos Aires,Cryptosporidium was diagnosed in 15 patients of the 132 studied. The TaqMan PCR and the nested-PCR-RFLP detected Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium hominis, and co-infections of both species. In Brazilian samples, the subtypes IbA10G2 and IIcA5G3 were observed. The subtypes found in Argentinean samples were IbA10G2, IaA10G1R4, IaA11G1R4, and IeA11G3T3, and mixed subtypes of Ia and IIa families were detected in the co-infections. C. hominis was the species more frequently detected, and subtype family Ib was reported in both countries. Subtype diversity was higher in Buenos Aires than in Rio de Janeiro and two new subtypes were described for the first time.
Assuntos
Adolescente , Adulto , Idoso , Criança , Pré-Escolar , Feminino , Humanos , Lactente , Masculino , Pessoa de Meia-Idade , Adulto Jovem , Criptosporidiose/microbiologia , Cryptosporidium/genética , DNA de Protozoário/genética , Variação Genética/genética , Argentina , Brasil , Cryptosporidium/classificação , DNA Ribossômico/genética , Genótipo , Polimorfismo de Fragmento de Restrição , Análise de Sequência de DNARESUMO
Enterocytozoon bieneusi es el microsporidio que más comúnmente ha sido identificado en pacientes con SIDA. En este trabajo, se describen las manifestaciones clínicas de un paciente con diarrea crónica, pancreatitis y colangitis esclerosante asociada con SIDA. Los estudios por imágenes, con ultrasonografía y colangiopancreatografia retrógrada endoscópica, revelaron alteraciones en la vía biliar intra-y extrahepática, idénticas a las observadas en colangitis esclerosante. Se detectó Enterocytozoon bieneusi en duodeno y duodeno peripapilar por microscopia óptica y se confirmó por la reación en cadena de la polimerasa (PCR) utilizando primers específicos en muestras incluidas en parafina. La infección con microsporidios se debería sospechar en nuestro país en pacientes con inmunodeficiencia severa y colangitis esclerosante asociada con SIDA.
Assuntos
Humanos , Masculino , Adulto , Infecções Oportunistas Relacionadas com a AIDS/parasitologia , Colangite Esclerosante/parasitologia , Microsporida/isolamento & purificação , Microsporidiose/complicações , Infecções Oportunistas Relacionadas com a AIDS/diagnóstico , Colangiopancreatografia Retrógrada Endoscópica , Colangite Esclerosante/diagnóstico , Primers do DNA/análise , Evolução Fatal , Microsporidiose/diagnóstico , Reação em Cadeia da PolimeraseRESUMO
El protozoario Cryptosporidium sp. ha sido reconocido crecientemente en asociación con enteritis grave en paceintes con el síndrome de immunodeficiencia. Los individuos estudiados comprendieron 84 adultos com SIDA y diarrea crónica. En este trabajo se describen 14 pacientes con infección intestinal causada por Cryptosporidium sp. La media del recuerdo de CD4 en estos pacientes fue (300 células/mm3 (en 7 de los 14). El examen de aspirados duodenales y heces incluyó preparaciones de muestras concentradas coloreadas con Kinjoun, Dimetilsulfóxido y Auramina. Se realizaron videoesofagogastroduodenoscopías (VEDA) para inspeccionar visualmente la mucosa y obtener biopsias. La VEDA reveló duodeno granular en 10 pacientes y jaspeado en uno de ellos. Las biopsias duodenales fueron coloreadas con hematoxilina-eosina, Giemsa y Azur II. Los acambios histológicos incluyeron atrofia (3/14), duodenitis (2/14) a ambos (3/14). La microscopía eletrónica de transmisión fue usada para la identificación de estadíos de desarrollo de Cryptosporidium sp.
Assuntos
Adulto , Animais , Feminino , Humanos , Infecções Oportunistas Relacionadas com a AIDS/parasitologia , Criptosporidiose/diagnóstico , Cryptosporidium/ultraestrutura , Criptosporidiose/fisiopatologia , Cryptosporidium/isolamento & purificação , Microscopia EletrônicaRESUMO
Microsporidia are protozoan parasites responsible for significant gastrointestinal disease in patients infected with the human inmunodeficiency virus. We reporte the clinical features of three patients with chronic diarrhea and intestinal microsporidiosis caused by Enterocytozoon bieneusi. The average value for CD4 in these patients was ó 50 cells/mm3. The spores were detected in smears from stool samples and duodenal aspirates stained with trichrome blue in all patiens. Light microscopy of semithin plastic sections revealed parasites and spores in the enterocytes and were associated with villous atrophy (2 out of 3). Thin section-electron microscopy showed a variety of developmental stages of the microsporidio. Patients treated with Albendazole had an unsatisfactory clinical response to therapy. Enterocytozzon bieneusi infection may be an important cause of diarrhea in patiens with AIDS in our country.